上海科新生物技术股份有限公司

联系我们

订货电话:021-51320393

订货传真:021-51320393

质量反馈电话: 4000215180

地址:上海市浦东新区哈雷路1011号9号楼501

上海科新

免疫印迹技术简介

免疫印迹技术(immuohlotting )是生物大分子印迹术中的一种。 1975 年,Southern 将酶切的 DNA片段用琼脂糖凝胶电泳分离,再借助毛细管作用将凝胶上的区带转移吸附于硝酸纤维素 (NC) 膜上,膜上的 DNA 片段与特定的放射性同位素标记的cDNA探针杂交,通过放射自显影检出待测的 DNA片段。此技术即 DNA 印迹术,当时称为 Southernblotting 1977Alwine等对此法改良,将不能有效地结合于NC膜上的RNA和小片段DNA共价交联于偶氮次苄基羟甲基纸上,该技术被称为RNA印迹。由于Southern EM的姓Southern 含有南部之意,故有人戏称RNA印迹术为northern blotting (北部印迹术)1981 Bernette 等建立蛋白质印迹术,即将在十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离的蛋白质转移到NC膜上进行分析,此技术被人称为西部印迹术(western blotting) ;而1982年,Reinhart等建立的电聚焦后的蛋白质印迹术即称为东部印迹术(eastern blotting) 因此,除Southern 印迹术取名于作者之姓外,其他印迹术之名均为杜撰,不仅不能反映各种印迹术的本质特征,更在名称上造成混乱。对此应予规范,按其用途称为 DNA 印迹、 RNA 印迹和蛋白质印迹。

【原理】

免疫印迹术是建立在蛋白质印迹基础之上的。含多种蛋白质成分的生物液体经 SDS-PAGE 分离,在凝胶板上依相对分子质量的大小形成位置不同的区带。然后用电转印或其他转印方法将凝胶板分离的蛋白质转印至 NC 膜或其他材料的膜上,再依次用特异性抗体(一抗)和酶(辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶)或放射性同位素、胶体金标记的抗抗体(二抗)与膜上蛋白质反应进行抗原或抗体的特异性分析。

免疫斑点法是免疫印迹法的一种改进方法。将多种亲和层析纯化的、生化性质明确的核抗原平行包被到膜条上作为固相,可用于SmSS-A SS-BScl-70Jo-l、核糖体P蛋白、组蛋白和核小体等抗体的定性检测。在第一次温育时,己稀释的患者血清与膜条上的抗原反应,特异性自身抗体与相应抗原结合,加入酶标记抗人IgG(酶结合物)进行第二次温育,然后加入底物/色原溶液呈色。此法所用抗原有别于免疫印迹法,为纯化抗原,各抗原带在膜上的位置固定,且膜条上无杂蛋白,不会产生非特异性反应,结果判断比免疫印迹法更简单。